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钙调蛋白及其突变体与NaV1.2 IQ的结合作用

 

中国医科大学:宛昱君,刘君妍 

指导教师:郭凤(教授) 

摘要:目的:探讨在不同钙离子浓度下电压门控性钠离子通道(NaV)1.2与钙调蛋白(CaM)的结合,并分析CaM的钙离子结合位点突变后与NaV1.2结合能力的变化。方法:应用PCR技术构建NaV1.2蛋白片段异亮氨酸-谷氨酰胺(IQ)基序的cDNA,采用QIAGEN点突变技术构建CaM突变体(CaM12、CaM34、CaM1234),应用牵出(Pull-down)试验技术检测有钙(100nmol/L钙离子浓度)和无钙条件下NaV1.2IQ与CaM及其突变体(CaM12、CaM34、CaM1234)的结合情况。结果:CaM与NaV1.2IQ在无钙和有钙情况下均可互相结合,而单独重组谷胱甘肽-S-转移酶(GST)不具有与CaM结合的能力;无钙条件下CaM与NaV1.2IQ的结合量大于有钙条件下两者的结合量(P<0.05);无钙条件下,CaM野生型与NaV1.2 IQ结合量大于CaM突变体与NaV1.2IQ的结合量,其中CaM1234的结合能力在三个突变体中最弱(P<0.05)。结论:CaM及其突变体对NaV1.2IQ的结合具有钙离子依赖性,这一CaM调控NaV1.2新机制为离子通道疾病研究提供了一定依据。 

发表期刊:《浙江大学学报(医学版)》 

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